百度账号六个月不登陆，百度保留关闭的权利，这是什么意思？

就像腾讯回收3个月不用的账号一样的道理。你偶尔登一下就OK了嘛！又不要你的命。而且你把主页添加一下百度，把你的账号登一下。每次打开网站的时候，不就有了。

酶切连接可以一步完成么? 什么情况下分开,什么情况下一步完成?

什么情况下也不可以。因为限制性内切酶需要先失活，否则一边连一边切，效率太低了。

1. 如果是单酶切，需要去磷酸化，有的可以把去磷酸化和酶切一起做。但是去磷酸化酶需要失活，然后才能用于连接，所以不能一步完成。

2.如果做双酶切，或者是切掉的碱基比较多，必须要做胶回收，否则，连接酶一旦进入，切掉的片段又连回去了。

不要怕麻烦，连接还是非常重要的一步。可以稍微简化酶切后的回收过程，如果只是简单切点少数几个碱基，电泳分不出来的话，直接用PCR clean up kit简单纯化，把酶去掉就可以了。否则还是老老实实，一步步来吧。